AAV类病毒颗粒(VLP)
AAV类病毒颗粒(有时称为AAV空壳)是一种经过鉴定的AAV衣壳,其不含有任何病毒基因组成分,是在AAV基因治疗的开发过程中被广泛使用的标准品。AAV类病毒颗粒不仅可用于校准和优化各种分析试验,比如ELISA和HPLC,还可用于药物开发过程中的各种其他应用,包括组织分布鉴定和评估特定血清型的AAV衣壳在体内的免疫应答效应。我们的预制AAV类病毒颗粒经过多方面性能验证,是作为评估实验室生产的AAV类病毒颗粒额的可靠质量标准。此外,在为了证明观察到的效应是由AAV载体所携带的表达盒而不是其衣壳引起的研究中,它们可以用作阴性对照。AAV类病毒颗粒也是研究AAV生命周期各个过程的重要工具,包括衣壳组装和衣壳蛋白的翻译后修饰等步骤。
我们的AAV类病毒颗粒存储于特殊的PBS缓冲液(pH7.4,添加200 mM NaCl和0.001% pluronic F-68),并以干冰形式发货运输。收到AAV类病毒颗粒后,长期存储请放置于-80℃(可稳定保存至少1年),短期存储请放置于-20℃(可保存2-3周)。解冻状态的AAV类病毒颗粒可以在4℃保存1-2周。
图1SDS-PAGE银染显示预制的血清型1、2、5、8、9 AAV类病毒颗粒
图2电荷检测质谱 (Charge Detection Mass Spectrometry,CDMS)分析AAV8的类病毒颗粒和其普通AAV样本中的空壳率。黑色代表空壳颗粒的百分比,绿色代表填充有基因组的颗粒的百分比。
图3透射电子显微镜(Transmission Electron Microscopy,TEM)下的AAV9类病毒颗粒。空壳为黑色填充的颗粒,有基因组的颗粒则为白色所填充。
当今已有相当多的AAV在自然界中被发现。根据其衣壳蛋白的抗原性,AAV可以被划分为不同的血清型。人们发现不同的血清型的AAV在体内具有不同的组织嗜性。我们可以使用不同的衣壳蛋白包装出相应血清型的AAV病毒载体。下表展示了我们默认提供的血清型类型和其对应的组织嗜性:
我们的AAV类病毒颗粒是通过向包装细胞瞬时转染相应血清型的AAV cap基因载体生产的。我们的AAV类病毒颗粒会经过柱层析纯化。我们也可以使用昆虫杆状病毒-Sf9细胞包装系统生产定制AAV类病毒颗粒。
我们最终放行的AAV类病毒颗粒均经过大量的严格QC测试。默认检测内容有SDS-PAGE、BCA、内毒素测试、以及微生物检测等。根据需求,我们还可为定制AAV类病毒颗粒提供TEM、CDMS、SV-AUC等检测服务,以测定空壳率等参数。
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