作为全球最大的定制载体服务商，云舟生物可以根据您的实验需求量身定制您的DNA载体。我们拥有超过200种经过优化且适用于各种研究应用的载体系统，均经过体外试验以及体内试验（若可行）验证。使用我们的平台进行载体定制和克隆将显著降低传统实验室DIY载体的试剂、时间和人力成本，大幅提高研究者的载体构建效率。

　　除了DNA载体的分子克隆外，我们还提供多种相关服务如质粒DNA制备病毒包装文库构建细胞稳转株构建以及治疗性IVT RNA合成等。

　　免费、高度直观的载体设计平台，可帮助您使用我们经过验证的海量的库存载体骨架和载体元件快速定制您所需要的载体。

　　乐高式的载体元件组装流程，可支持定制载体高效且可靠的平行克隆，超过95%的项目如期交付。

　　客户拥有其定制载体的IP并享有6个月免费载体存储服务（超过6个月的载体收取一定基因调取费用）。

　　超过80%的载体元件可直接从我们的库存（基于过去的生产数据）中调取，其余则可通过从头合成、客户提供的材料（载体骨架和模板）中获得。我们的定制载体构建流程包含了对客户材料的QC（若有需要）、调取载体元件和载体骨架、实际的载体克隆工作、以及最后的放行前的载体QC。关于我们的定制载体构建服务的价格和周期概览下所示：

　　* 周期的定义：从接受订单到发货的时间，不包括客户准备材料所需要的时间（例如提供模板DNA）。腺病毒载体可能需要更长时间。

　　复杂载体是指使用VectorBuilder标准化骨架，但由更为复杂的需要构建的元件组装而成的载体。它们通常要经过多个步骤来构建，并且涉及复杂的操作过程，例如大片段的扩增、多个片段融合、基因合成和靶向突变等。

　　对于克隆上面未列出的其他类型片段，例如高GC片段，简单重复或分段重复序列，可能需要额外的费用和周期。

　　*对于7kbORF10kb的，需要额外增加￥1,000 费用和 10 天的周期。对于ORF需要添加promoter、tag或者在其两端添加酶切位点的，额外费用请咨询。

　　**对于10kb的ORF，合成费用将根据合成的长度定价在￥1/bp-￥1.5/bp之间。对于10kb的ORF，基因从头合成的价格与周期请咨询。

　　我们保证所有交付的载体其实际序列与理论序列100%相符。.下表展示了我们的载体QC项目。

　　如果客户选择自行提供载体构建的相关材料，我们将对其提供的载体骨架进行限制性内切酶酶切鉴定，并对关键区域进行测序验证。该类载体属于非标准载体，载体价格因情况而定。如果需要提供骨架或模板，请按照外来物品接收指南将相应材料邮寄给我们。

　　云舟生物可使用多种策略进行载体克隆。在我们的高度优化的克隆平台上，一般的表达载体我们使用Gateway克隆和Gibson组装等方式构建，而shRNA和gRNA载体则使用基于直接连接的方式构建，价格低且周期短。此外，根据具体项目的需要，我们也可以使用从头基因合成、Golden Gate等方式构建载体。

　　云舟生物构建的质粒载体的宿主菌通常为VB UltraStable，一种转化效率高（1x109cfu/ug）并可用于扩增不稳定重复序列的菌株。因此，我们也高度推荐您使用我们的VB UltraStable化学感受态细胞以用于您的载体扩增实验。我们也提供其它宿主菌，如DH5和Stbl3，可满足多样的实验需要。

　　质粒的拷贝数是由质粒上的复制起点决定的，有的复制起始点属于低拷贝型。请确认质粒上复制起点类型。对于低拷贝质粒，则需要扩大细菌培养量以获得足够的质粒DNA。

　　请检查确认质粒制备柱的结合容量以及您的质粒是高拷贝还是低拷贝质粒。对于小量提取，我们建议您收集1-5 ml过夜培养菌液。对于大量提取，如果质粒是高拷贝，我们推荐使用100-150 ml过夜培养菌液；如果是低拷贝，我们推荐使用300-500 ml过夜培养菌液。一般情况下，对于高拷贝质粒，1 ml的过夜培养菌液可以小量提取约5 ug的质粒DNA，150 ml的过夜培养菌液可以提取约500 ug的质粒DNA；对于低拷贝质粒（如pET），1 ml过夜培养菌液可以小量提取1.5-2.5 ug质粒DNA，150 ml过夜培养菌液可以提取150-200 ug质粒DNA。

　　有的抗生素，尤其是氨苄青霉素，在液体培养中会快速降解，导致不含质粒的细菌可以大量繁殖，最终使得质粒制备产量低。为了避免这种情况，请在使用前新鲜制备含氨苄青霉素的生长培养基，并确保提供足够的浓度。另外，在培养具有氨苄抗性的细菌时，请不要让菌液饱和培养时间过长。因为随着培养时间的增加，培养基的抗生素会越来越少，许多细菌细胞也已死亡且它们所含的质粒DNA会被降解，所以从过饱和培养的菌液中提取的质粒DNA产量会低。请从新鲜菌液提取质粒DNA，如果不能立即进行质粒制备，则可以将菌体离心沉淀，并储存于-80C冰箱中备用。

　　直接将接收到的甘油菌或穿刺菌进行接种，可能会偶尔出现质粒制备产量低的情况。我们建议先在含有适当抗生素的LB平板上划线，然后挑取单菌落接种到含有相应抗生素的新鲜液体培养基中。具体操作说明请在菜单栏“资源中心说明书/MSDS甘油菌”进行查看。

　　当我们对客户材料进行QC时，如果发现序列有突变，我们会主动联系您以确认是否仍然进行载体构建。如果突变属于同义突变，则通常不会影响实验结果。如果突变属于非同义突变，我们会与您沟通在载体构建和下游实验前最佳的处理方案。

　　载体家构建的质粒载体一般以甘油菌形式交付。关于甘油菌的使用可参考以下视频内容：